使用基于共价片段的查方法发现一种细胞活跃的奇昆古尼亚病毒nsP2蛋白酶抑制剂

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 药物发现 药物发现 药物发现
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 奇孔古尼亚病毒 (CHIKV) 导致广泛爆发,缺乏经批准的治疗方法.
• CHIKV非结构蛋白2 (nsP2) 蛋白酶对于病毒复制至关重要,也是关键的药物标.

研究的目的:

• 通过共价片段查,识别CHIKV nsP2蛋白酶的新型抑制剂.
• 描述已识别的抑制剂的疗效和选择性,以便潜在的治疗开发.

主要方法:

• 对CHIKV nsP2蛋白酶进行了6120个化合物共价片段库的选.
• 剂量响应和时间依赖的抑制试验以确定IC50和动力参数.
• 用于特定站点的共价变异分析的LC-MS/MS.
• 针对囊蛋白酶组的非标反应性评估.
• 在细胞模型中对alphavirus感染的评估.

主要成果:

• 从共价片段库中识别了153个匹配结果 (2.5%的匹配率).
• RA-0002034抑制了CHIKV nsP2蛋白酶,其IC50为58±17nM,k_inact/K_I为6.4 x 10^3 M^-1 s^-1. 这种蛋白酶具有6.4 x 10^3 M^-1 s^-1.
• RA-0002034对特定位点的催化氨酸进行了共价性修改,并且没有显著的目标外反应性.
• RA-0002034在细胞模型中有效抑制了CHIKV和其他阿尔法病毒的复制.

结论:

• RA-0002034是CHIKV nsP2蛋白酶的强效和选择性共价抑制剂.
• 化片段查是有效的发现阿尔法病毒抑制剂.
• RA-0002034代表了开发CHIKV或泛阿尔法病毒疗法的有前途的化学探针.