埃舍里希亚大肠杆菌与二硫化物结合蛋白的细胞质表达:两种竞争策略之间的并排比较
Angel Castillo-Corujo1, Yuko Uchida1, Mirva J Saaranen1
1Faculty of Biochemistry and Molecular Medicine, University of Oulu, Oulu FI-90014, Finland.
Journal of microbiology and biotechnology
|April 2, 2024
概括
这项研究比较了在大肠杆菌中生产二硫化键蛋白的两种方法,发现CyDisCo在定义介质中优越,并且在丰富介质中的大多数蛋白质中优越. SHuffle菌株在丰富的介质中表现出色的可溶性蛋白质.
科学领域:
- 重组蛋白质生产的重组蛋白质生产
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 在大肠杆菌中生产二硫化键蛋白的传统方法 (重新折叠,周等离子体向) 有局限性.
- 细胞质生产策略包括工程菌株 (例如,SHuffle) 和氧化折叠催化剂 (例如,CyDisCo) 的共同表达.
- 这些细胞质策略的比较有效性尚未被系统评估.
研究的目的:
- 系统地比较使用SHuffle菌株与E. coli中的CyDisCo系统中的14个含二硫化键蛋白的净化产量.
- 评估不同背景菌株,促进体和介质类型 (定义与丰富的自诱导) 对蛋白质生产的影响.
- 通过任何一种系统生产的蛋白质质量的评估.
主要方法:
- 在工程化大肠杆菌菌株 (SHuffle) 和共同表达氧化折叠催化剂 (CyDisCo) 的菌株中表达14种不同感兴趣的蛋白质 (POI).
- 对不同细菌菌株,促进体和介质条件 (定义和丰富的自诱导) 中净化蛋白质产量的比较.
- 对三个选定的POI进行蛋白质质量的评估.
主要成果:
- 在丰富的自诱导介质中,SHuffle在可溶性 (非原生) 蛋白质中产生了更高的纯化蛋白质,而CyDisCo在其他蛋白质中表现优越.
- 在化学定义的介质中,CyDisCo始终对所有测试的蛋白质产生至少10倍的净化产量.
- 当使用CyDisCo系统对三个评估的POI进行评估时,蛋白质质量更好.
结论:
- 一般来说,CyDisCo对于在大肠杆菌中产生含有二硫化键的蛋白质更有效,特别是在化学定义的介质中.
- 在SHuffle和CyDisCo之间做出选择取决于特定的蛋白质和表达条件,CyDisCo显示了更广泛的适用性和更高的产量.
- 赛迪斯科在定义的介质中提供了更好的蛋白质质量和显著更高的产量,使其成为许多重组蛋白质生产应用的首选策略.
