对人类瘤亡因子的补充DNA的分子克隆

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物化学 生物化学
• 免疫学 免疫学 免疫学

背景情况:

• 瘤亡因子 (TNF) 是一种对瘤细胞具有选择性毒性的蛋白质.
• 了解TNF的特性对于癌症研究至关重要.

研究的目的:

• 为了从白血病细胞中净化人类TNF.
• 确定其氨基酸序列并克隆相应的cDNA.
• 为了在细菌中实现TNF的高水平表达.

主要方法:

• 从HL-60白血病细胞中净化蛋白质.
• 氨基酸测序N端的氨基酸测序.
• 使用合成的寡核酸探针进行cDNA克隆.
• 核酸序列分析.核酸序列分析.
• 在大肠杆菌中使用lambda PL促进剂的表达.

主要成果:

• 人类TNF被净化为具有细胞毒性和细胞静止活性的17.3kDa蛋白质.
• 确定了N端的氨基酸序列.
• 人类TNFcDNA (1585 bp) 编码233个氨基酸被克隆.
• 成熟的TNF从残留77开始,具有76个氨基酸领导序列.
• 在大肠杆菌中实现了高水平的TNF表达.

结论:

• 成功净化和对人类TNF的表征.
• 人类TNFcDNA的克隆为进一步研究提供了一个工具.
• 工程化的大肠杆菌系统允许大规模的TNF生产.