为核孕激素受体 (pgr) 建立基于石墨烯量子点 (GQD) 的类固醇结合试验
Md Forhad Hossain1, Shakhawat Hossain2, Md Maisum Sarwar Jyoti1
1Department of Bioscience, Graduate School of Science and Technology, National University Corporation, Shizuoka University, 836 Ohya, Suruga-ku, Shizuoka, 422-8529, Japan.
Biochemistry and biophysics reports
|April 4, 2024
概括
通过使用石墨烯量子点 (GQD) 为核孕激素受体 (Pgr) 开发了一种新的同质测定方法. 这种方法通过测量光变化来检测Pgr联结,为研究Pgr活性提供了一个敏感的工具.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 纳米技术纳米技术
背景情况:
- 之前已经建立了使用石墨烯量子点 (GQD) 和光共振能量转移 (FRET) 的膜孕激素受体α (mPRα) 连接体测定.
- 核孕激素受体 (Pgr) 在各种生理过程中起着至关重要的作用,需要敏感的检测方法.
- 现有的Pgr联体结合方法可能缺乏全面分析所需的灵敏度或同质性.
研究的目的:
- 为核孕激素受体 (Pgr) 开发一种同质的联结试验.
- 为了适应以前建立的基于GQD的FRET测定对Pgr.
- 为了确认开发的测定对Pgr配体的特异性和灵敏性.
主要方法:
- 表达和净化斑马鱼Pgr (zPgrLBD) 的联结域 (LBD) 作为一个谷氨酸S转移酶 (GST) 融合蛋白.
- 将纯化的GST-zPgrLBD与石墨烯量子点 (GQD) 结合在一起,以创建GQD-GST-zPgrLBD.
- 使用孕激素-BSA-素异硫酸联体 (P4-BSA-FITC) 和光共振能量转移 (FRET) 进行检测,在370nm激发时在520nm测量光.
- 使用放射性标记的类固醇结合试验确认了结合.
主要成果:
- 在GQD-GST-zPgrLBD试验中,当与P4-BSA-FITC混合时,在520nm时显示出基于FRET的光.
- 添加自由孕激素或已知的zPgr配体显著降低了光信号,表明了特定的配体受体结合.
- 非连接体类固醇和化学物质没有诱导光减少,证实了对zPgr连接体的测试特异性.
- 结果被放射性标记的类固醇结合试验证实.
结论:
- 通过使用基于GQD的FRET.成功建立了一种针对核孕激素受体 (Pgr) 的新型均质联结试验.
- 该试验对Pgr配体具有很高的特异性,并且可以有效检测配体-受体相互作用.
- 这种与GQD相结合的试验为选Pgr配体和研究Pgr活性提供了一个敏感和均的平台.
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