IMPATIENT-qPCR:监测SELEX在体外体进化过程中的成功
Ann-Kathrin Kissmann1,2, Grigory Bolotnikov1, Runliu Li1
1Institute of Pharmaceutical Biotechnology, Ulm University, Albert-Einstein-Allee 11, 89081, Ulm, Germany.
Applied microbiology and biotechnology
|April 4, 2024
概括
通过指数式丰富 (SELEX) 的联体的系统进化可以通过IMPATIENT-定量PCR (qPCR) 改进. 这种方法监测着阿普坦细胞的演变和亲和力,加速了诊断工具的发展.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 对于开发用于诊断和生物传感的吸收体来说,SELEX是至关重要的.
- 在SELEX中缺乏过程中质量控制,导致成功率低.
- 胺剂是诊断试验的关键组成部分,特别是在新出现的传染病中.
研究的目的:
- 提出一种定量PCR (qPCR) 方法,用于在SELEX期间监测体进化.
- 为了快速,轻松地量化绑定到它们的目标的aptamers.
- 为质量控制,将化温度 (Tm) 与阿普坦胺亲和度和GC含量相关联.
主要方法:
- 使用SYBR绿色I染料进行定量PCR,用于aptamer量化.
- 进行了化曲线分析,以确定每个SELEX轮的化温度 (Tm).
- 将该方法应用于9个成功的SELEX项目,包括多克隆图书馆和单个aptamers.
主要成果:
- 证明了IMPATIENT-qPCR的功能,用于监测吸血体进化和亲和力.
- 显示了增加GC含量,Tm和aptamer亲和力之间的相关性.
- 证实了该方法在各种成功的SELEX过程中的适用性.
结论:
- IMPATIENT-qPCR提供了一种快速,简单和通用的SELEX质量控制方法.
- 这种技术可以通过实时提供进化反来加速SELEX过程.
- 该方法有助于开发用于先进诊断应用的高 afinity aptamers.
