基于RPA辅助的CRISPR/Cas12a,用于吐性Bacillus cereus的通用和裸眼诊断平台

科学领域:

• 食品微生物学 食品微生物学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 排泄性细菌 (B. cereus) 构成严重的公共卫生风险,导致食物中毒和严重的健康并发症.
• 准确和快速的检测方法对于预防疫情和确保食品安全至关重要.

研究的目的:

• 开发一个通用的裸眼诊断平台,用于检测吐性B. cereus.
• 针对cereulide合成酶生物合成基因 (cesB) 进行特定识别.

主要方法:

• 使用复合酶聚合酶放大 (RPA) 与CRISPR/Cas12a技术相结合.
• 开发了一种单检测系统,其中的组件分别添加到管底和盖上.
• 使用基因组DNA (gDNA) 和细菌细胞验证了平台,包括添加食品样本.

主要成果:

• 实现了对gDNA的10^-2 ng μL^-1和细胞的10^2 CFU mL^-1的视觉检测极限.
• 在大米,牛奶和熟肉样本中表现出一致的敏感性,即使是简单的gDNA提取.
• 在40分钟内完成了整个检测过程,在2-5小时的丰富后,单细胞检测是可能的.

结论:

• 通过RPA辅助的CRISPR/Cas12a平台提供了高特异性,灵敏性,速度和简单性.
• 这种测试代表了RPA-CRISPR/Cas12a在吐性B. cereus检测中的首次应用.
• 该平台是一个有前途的工具,用于在现场检测各种食物矩阵中的排泄性B. cereus.