使用CRISPR/LwCas13a侧流带基于D117L结构蛋白基因的非洲猪瘟病毒视觉检测的开发
Desheng Zhang1, Sen Jiang1, Nengwen Xia1
1College of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, PR China; Joint International Research Laboratory of Agriculture and Agri-Product Safety, Yangzhou 225009, PR China; Comparative Medicine Research Institute, Yangzhou University, Yangzhou, 225009, PR China; Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou, 225009, PR China.
非洲猪瘟病毒 (ASFV) 的新快速检测方法使用复合酶聚合酶放大 (RPA) 和CRISPR/LwCas13a技术. 这种高度敏感和特定的测试可以在现场检测ASFV,这对于疾病控制至关重要.
科学领域:
- 兽医病毒学 兽医病毒学
- 分子诊断学 分子诊断
- 生物传感技术的技术
背景情况:
- 非洲猪瘟病毒 (ASFV) 是一种高度传染性的树状病毒,威胁着全球猪群.
- 在全球范围内,ASF疫情造成了巨大的经济损失.
- 目前有效的疫苗和治疗方法的局限性需要改进的诊断工具.
研究的目的:
- 开发一种快速,灵敏和特定的诊断试验来检测ASFV.
- 创建一个便携式和用户友好的方法,用于现场的ASFV识别.
- 帮助预防和控制非洲猪瘟疫情爆发.
主要方法:
- 开发一个侧流带 (LFS) 试验.
- 重组酶聚合酶放大 (RPA) 的整合用于核酸放大.
- 使用CRISPR/LwCas13a进行针对p17基因 (D117L) 的特定ASFV检测.
- 在37°C的温度下进行测试,视觉读取.
主要成果:
- 开发的RPA-LwCas13a-LFS试验显示出高灵敏度,检测到2个基因副本.
- 该方法具有很高的特异性,对其他七种常见的猪病毒没有交叉反应.
- 在分析200个临床样本时,观察到RPA-LwCas13a-LFS测定和定量PCR (qPCR) 之间的100%一致性.
结论:
- RPA-LwCas13a-LFS测定是一种有前途的工具,用于快速,敏感和特定的现场检测ASFV.
- 这种方法为ASF监测提供了传统诊断技术的有价值的替代方案.
- 该技术有助于及时干预和管理非洲猪瘟.
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