一种快速,无需设备的方法,用于检测Pyricularia oryzae的毒性基因,使用侧向流带式RPA试验
Zhongqiang Qi1,2, Fangyi Ju3, Yunxia Guo1
1Institute of Plant Protection, Jiangsu Academy of Agricultural Science, Nanjing, China.
Plant disease
|April 8, 2024
概括
一个新的快速重组酶聚合酶放大-侧流测量棒 (RPA-LFD) 系统可以检测大米爆发病原体Pyricularia oryzae中的关键激发性 (Avr) 基因. 这项技术有助于监测基因分布,用于培育抗性大米品种.
科学领域:
- 植物病理学 植物病理学
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 米爆发,由*Pyricularia oryzae*引起,是全球大米生产的重大威胁.
- 耐药大米品种对于经济有效的疾病管理至关重要.
- 监测激烈性 (Avr) 基因分布对于繁殖耐药品种至关重要.
研究的目的:
- 开发一种快速和灵敏的检测系统,用于特定的Avr*基因 (*AvrPik*, *Avr-Piz-t*, *Avr-Pi9*) 在水中.
- 在速度,特异性和灵敏度方面评估系统的性能.
- 通过简化DNA提取来证明该系统在现场条件中的适用性.
主要方法:
- 开发一种复合聚合酶放大-侧流滴杆 (RPA-LFD) 试验.
- 针对RPA的反应条件 (温度和时间) 的优化.
- 使用已知DNA度进行特异性和灵敏性测试.
- 在使用快速PEG-NaOH方法从爆病变中提取的DNA上应用RPA-LFD系统.
主要成果:
- 一个优化的RPA-LFD系统在体温 (37°C) 的20分钟内检测到*AvrPik*,*Avr-Piz-t*和*Avr-Pi9*.
- 该系统在属级别上表现出高特异性.
- 检测极限低至*AvrPik*的10 fg/μl,*Avr-Piz-t*的100 fg/μl和*Avr-Pi9*的10 pg/μl,超过了PCR灵敏度.
- 该试验成功地通过快速DNA提取直接从大米爆炸病变中识别了目标*Avr*基因.
结论:
- 成功建立了一种新的,快速和灵敏的RPA-LFD检测系统,用于关键的米爆 *Avr* 基因.
- 该系统与快速DNA提取相结合,为实时现场检测提供了一个实用的工具.
- 这些发现为了解*Avr*基因分布和指导抗性大米品种的战略部署提供了有价值的数据.
