一个新的系统来确定单个尿素5'-二酸葡萄糖转移酶 (UGT) 异型的活性:重组UGT-珠
Ting Wang1, Mitchell E Taub1, Tom S Chan1
1Department of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc, Ridgefield, Connecticut, USA.
研究人员开发了用于直接UGT异型分析的重组UGT珠. 与传统方法相比,这种新的系统显示出更高的催化效率和减少脂肪酸抑制,为药物代谢研究提供了有价值的工具.
科学领域:
- 生物化学 生化学
- 药理学 药理学 是一个学科.
- 药物新陈代谢 药物新陈代谢
背景情况:
- 人类肝脏显微体 (HLMs) 结合到涂的磁化珠,保留尿素5'-二-葡萄糖转酶 (UGT) 活性.
- 评估HLM珠中的单个UGT异型贡献传统上需要模型抑制剂.
- 需要使用与珠子 (rUGT-beads) 结合的重组UGT (rUGT) 异型的系统进行直接异型分析.
研究的目的:
- 在rUGT珠中研究各种rUGT异型的酶活性和动态参数.
- 为了评估脂肪酸 (FA) 对rUGT-bead酶活性的影响.
- 建立rUGT-beads作为直接UGT异形贡献评估的新系统.
主要方法:
- 准备将重组UGT (rUGT) 显微体结合到涂有的磁化珠 (rUGT-珠).
- 在rUGT珠和传统的rUGT显微体中测量各种rUGT异型的酶活性和动力参数 (Vmax/Km).
- 研究脂肪酸 (FA) 和牛血清白蛋白 (BSA) 对酶动态的影响.
主要成果:
- 对于大多数测试的异构体,与rUGT显微体相比,rUGT珠的催化效率 (Vmax/Km) 是2到7倍高.
- 与传统制剂不同,BSA对FA的封存并没有改变rUGT-bead的催化效率.
- rUGT珠的催化效率增加表明,珠可以减轻FA抑制,类似于BSA的效果.
结论:
- rUGT-bead系统提供了一个直接的方法来评估个别的UGT异形贡献.
- 这种无白蛋白系统表现出增强的催化效率和减少FA抑制.
- rUGT珠是确定UGT基质的动态常数的一个有希望的工具,特别是那些与白蛋白结合的工具.
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