在被困离子移动性光谱测量-质谱测量过程中,研究影响原生蛋白质构成的直流潜力
Robert L C Voeten1,2,3, Hany A Majeed1,2, Tijmen S Bos1,2
1Division of BioAnalytical Chemistry, Department of Chemistry and Pharmaceutical Sciences, Amsterdam Institute of Molecular and Life Sciences (AIMMS), Vrije Universiteit Amsterdam, Amsterdam, The Netherlands.
捕获离子移动性光谱-飞行时间质谱 (TIMS-TOFMS) 可以改变蛋白质结构. 研究人员确定了特定的直流 (DC) 潜力,在分析期间保持蛋白质原生状态,确保准确的构造性研究.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 生物化学 生物化学
- 物理化学 物理化学
背景情况:
- 捕获离子移动性光谱-飞行时间质谱 (TIMS-TOFMS) 是分析气相中的蛋白质构成状态的强大技术.
- 在TIMS分析中应用的直流 (DC) 潜力可能会因碰撞激活而导致蛋白质的结构变化.
研究的目的:
- 在TIMS-TOFMS分析过程中调查DC电位对蛋白质结构的影响.
- 建立最佳的直流电位条件,以保持蛋白质的原生形状.
主要方法:
- 对牛炭酸 anhydrase (BCA) 和五种其他多种蛋白质的DC潜在影响的评估.
- 分析离子电荷,血含量,电荷状态强度和 adduct 保留.
- 提取离子移动图和碰撞横截面 (CCS) 配置文件的构建.
- 主要组件分析 (PCA) 的应用,以将DC电位与蛋白质折叠状态相关联.
主要成果:
- 特定的直流电位 (D3和D6) 显著影响了BCA的CCS分布,表明在更高的值下展开.
- 大多数直流电位对BCA的CCS配置文件的影响最小,而其他电位与蛋白质电荷和折叠状态有相关性.
- PCA显示,D1和D3潜力与折叠/不折叠蛋白质比率 (F/U) 有最强的相关性.
- 观察了诱导形状变化的蛋白质依赖边界值.
结论:
- 在TIMS-TOFMS中,直流电位可以影响蛋白质的结构状态,其中D3和D6具有最深远的影响.
- 可以确定一组定义的直流值,以确保大多数蛋白质的原生分析.
- 这项研究为优化TIMS-TOFMS方法的关键参数提供了准确的蛋白质结构分析.
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