基于微模式数组编辑猪细胞的CRISPR/Cas9编辑效率的视觉选
Wanliu Peng1, Mengyu Gao1, Xinglong Zhu1
1Department of Pathology, Institute of Clinical Pathology, Key Laboratory of Transplant Engineering and Immunology, NHC, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, Sichuan, China.
Biotechnology journal
|April 16, 2024
概括
研究人员开发了一个新的平台,快速评估猪的CRISPR/Cas9基因编辑效率. CRISPR/Cas9的mRNA形式显示出最高的效率,使得成功的基因淘汰成为未来的进步.
科学领域:
- 动物生物技术动物生物技术
- 基因编辑技术的技术
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 对于基因编辑猪来说,CRISPR/Cas9和SCNT是关键.
- 编辑和交付效率低,阻碍了捐赠者获取.
- 目前的方法缺乏直接评估猪基因编辑效率.
研究的目的:
- 开发一个平台,以视觉评估猪基因组中的CRISPR/Cas9编辑效率.
- 在猪细胞中比较不同CRISPR/Cas9形式 (mRNA,DNA,RNP) 的编辑效率.
- 优化细胞培养条件,以有效评估基因编辑.
主要方法:
- 开发一个使用光报告和微模式数组的平台.
- 在微模式阵列 (200微米直径,150微米间距) 上优化猪细胞培养.
- 通过可视化光损失和测量灰色值来量化编辑效率.
主要成果:
- 与DNA和RNP形式相比,CRISPR/Cas9的mRNA形式在猪细胞中显示出更高的编辑效率.
- 为猪细胞培养物确定了最佳的微模式阵列规范.
- 使用mRNA形式成功生成了四个β4GalNT2基因淘汰同胞体.
结论:
- 开发的平台提供了一种快速,简单和有效的方法来评估猪的基因淘汰效率.
- 这个平台可以加快新基因编辑工具和传递方法的测试.
- 它为各种细胞类型量身定制评估平台提供了潜力.


