敏感病原体检测和药物耐药性特征使用由LAMP或CRISPR-Cas放大的病原体衍生酶活性

科学领域:

• 生物化学 生化学
• 分子生物学分子生物学
• 诊断检测试验 诊断检测试验

背景情况:

• 病原体衍生的酶对于复制至关重要,并且是潜在的药物标.
• 对酶活性的表型测定有助于病原体检测和药物耐药性测试.
• 开发针对病原体酶的敏感的临床检测 (POC) 是一个关键目标.

研究的目的:

• 开发用于检测病原体酶活性的敏感和适应性测试.
• 利用HIV逆转录酶 (RT) 作为测试开发的模型.
• 为了使酶抑制的表型特征能够用于药物耐药性测试.

主要方法:

• 工程RNA基质被用于检测HIVRT的互补DNA (cDNA) 生成.
• 使用循环介导同热放大 (LAMP) 或CRISPR-Cas系统放大cDNA产品.
• 分析 (LamPART和CasPART) 是为了敏感检测和酶活性的表型表征而开发的.

主要成果:

• 兰帕特检测到只有20个副本的HIVRT酶在一个指针体积的血.
• 卡斯帕特为HIV RT酶实现了1.67fM的检测极限.
• CasPART成功地表征了药物抑制,并从突变HIVRT中区分了野生类型,并适应了HIV整合酶检测.

结论:

• 开发的酶活性检测和产品放大方法为广泛的病原体检测提供了一个多功能平台.
• 这些测定方法,特别是CasPART,对临床诊断和表型药物耐药性测试具有重大潜力.
• 该方法可适应针对各种病原体衍生的酶,扩大其在传染病研究和临床应用中的实用性.