人类甲型肝炎病毒3C蛋白酶的His标记变体的表达和净化
Maria A Karaseva1, Vladislav A Gramma1,2, Dina R Safina1
1National Research Centre "Kurchatov Institute", Moscow 123182, Russia.
Protein and peptide letters
|April 22, 2024
概括
研究人员开发了一种方法,使用固定金属离子亲和染色学来产生活性复合性A型肝炎病毒3C蛋白酶 (3Cpro). 这种技术可以进一步研究3Cpro.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 生物化学 生物化学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 肝炎A病毒蛋白酶3C (3Cpro) 对于病毒复制至关重要,并诱导铁亡.
- 了解3Cpro的功能为我们提供了关于病毒与宿主相互作用和铁亡的见解.
- 对于这些研究来说,生产活性重组3Cpro是至关重要的.
研究的目的:
- 评估固定金属离子亲和染色学 (IMAC) 对于产生活性重组3Cpro.的有效性.
- 调查六胺标签放置 (N或C端) 对3Cpro生产和活动的影响.
主要方法:
- 修改后的3Cpro变体在大肠杆菌中的表达.
- 使用IMAC进行净化,然后进行凝透色谱.
- 用染色基质进行酶活性测定.
主要成果:
- 六西丁标签的存在和位置并没有改变3Cpro的酶活性.
- 最高的蛋白质产量是通过C终端的六西丁标签取代七个残留物来实现的.
- 再组合3Cpro已成功生成,并被证明具有酶活性.
结论:
- 描述的基于IMAC的方法是有效的生产酶活性重组3Cpro.
- 这种方法有助于进一步研究3Cpro在病毒病原和铁亡中的作用.
