12种呼吸道病原体的简单,敏感和视觉检测,使用单RPA-CRISPR/Cas12a测定

科学领域:

• 分子诊断学 分子诊断学
• 生物技术是生物技术.
• 传染病研究传染病研究.

背景情况:

• 呼吸道感染是全球主要的健康问题,需要先进的诊断解决方案.
• 与异热放大相结合的CRISPR/Cas系统在核酸测试 (NAT) 中表现有前途.
• 整合复合酶聚合酶放大 (RPA) 和CRISPR/Cas试剂在单管中存在挑战,原因是竞争性相互作用.

研究的目的:

• 开发一种新的,单管NAT方法,用于同时检测多种呼吸道病原体.
• 克服RPA-CRISPR/Cas集成系统中的试剂竞争问题.
• 为了实现细菌和病毒感染之间的区分,用于精准医学.

主要方法:

• 开发一种单复合酶聚合酶放大-CRISPR/Cas12a (单-RPA-CRISPR/Cas12a) 试验.
• 使用抛分离来分隔RPA和CRISPR/Cas12a反应,在单个管内顺序进行.
• 在LED蓝光下对结果的视觉检测.

主要成果:

• 同时检测了12种常见的呼吸道病原体 (6种细菌,6种病毒).
• 该试验显示出高灵敏度,检测极限为2.5 × 10^0副本/μL等离子体.
• 没有观察到与其他细菌或病毒物种的交叉反应.
• 通过对临床喉抽样样本的测试证实了有利的性能.

结论:

• 一RPA-CRISPR/Cas12a方法为多重呼吸道病原体检测提供了一个敏感和特定的平台.
• 该试验的设计克服了在整合RPA和CRISPR/Cas系统方面的先前限制.
• 这种新型的诊断工具具有重要的潜力,可以对呼吸道感染进行准确,大规模,临床检测.