使用基于活动的探针检测细胞溶解物中的硫诺基诺基酶活性

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 微生物学 微生物学
• 酶学 是一种酶学.

背景情况:

• 硫脂硫基诺瓦斯二甲基甘油 (SQDG) 是生物圈的主要硫储量.
• 微生物对SQDG的分解对于硫的利用至关重要,由硫诺酸酶 (SQases) 启动.
• SQases是31 (GH31) 糖化酶家族中的酶,编码在不同的催化基因集群中.

研究的目的:

• 开发基于活动的新型探针 (ABP),用于识别,可视化和隔离GH31SQases.
• 在复杂的生物样本和细菌生长过程中证明这些ABP的实用性.

主要方法:

• 设计和合成SQ环利托尔-亚齐里丁ABP,包括光 (Cy5) 和生物化版本.
• 在细菌细胞溶解物中应用ABP用于活性位点标记和可视化.
• 用于SQase捕获和识别的蛋白质组分析.
• 基于ABP的活动监测与传统RT-qPCRmRNA分析的比较.

主要成果:

• SQ环利托尔-亚齐里丁ABP特别标记GH31SQases的活性位点核.
• 巨杆菌SQase的3D结构证实了特定的探针识别.
• Cy5探针使在各种细菌溶解物中可视化SQases.
• 生物素探针通过蛋白质组学促进了SQase的捕获和识别.
• Cy5探针在细菌生长过程中提供了活跃SQase水平的动态监测,其性能优于mRNA分析.

结论:

• SQase ABP是研究这些关键酶的发生,活性和稳定性的有效工具.
• 这些探针比监测酶活性的传统方法有了显著的进步.
• 开发的ABP将有助于研究全球硫循环和SQases在人类微生物群中的作用.