对病毒性出血热的非传染性对照的开发 病毒性出血热PCR测定

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 病毒学 病毒学
• 诊断试验开发 诊断试验开发

背景情况:

• 测试验证对于疾病监测至关重要.
• 对安全的,积极的控制材料的有限访问带来了挑战.
• 高风险的病毒病原体需要安全的验证方法.

研究的目的:

• 开发和验证一种单一的非传染性合成控制,用于基于PCR检测多种危险病毒.
• 为了证明合成RNA控制在试验开发和验证中的实用性.
• 为病毒诊断提供比传统的阳性对照更安全的替代方案.

主要方法:

• 设计的合成DNA寡核酸具有5个病毒分析的原始结合点 (克里米亚 - 刚果出血热,埃博拉病毒病,拉萨热,马尔堡病毒病,裂谷热).
• 包含一个T7促进器部位用于体外转录以产生合成RNA.
• 通过RT-PCR和RT-qPCR进行提取和放大,在序列稀释中使用转录RNA作为模板.

主要成果:

• 在各种实验室环境中成功恢复合成RNA.
• 用合成控制来确定开发的测试的检测极限.
• 证实了合成控制的适应性,用于验证核酸提取和放大.

结论:

• 一个单一的非传染性合成RNA控制可以有效地支持开发和验证多种高后果病毒病原体的诊断试验.
• 这种方法在实验室环境中提高了安全性和可访问性,而传统的阳性控制是有问题的.
• 合成控制方法广泛适用于各种基于核酸的诊断分析.