使用FluidFM纳米注射和CRISPR/Cas9的基因工程单克隆CHO细胞系的加速生成
Justin S Antony1, Anabel Migenda Herranz2, Tahereh Mohammadian Gol1
1University Children's Hospital, Department of Pediatrics I, Hematology and Oncology, University of Tübingen, Tübingen, Germany.
Biotechnology journal
|April 23, 2024
概括
CellEDIT是一种新的CRISPR输送方法,它可以快速设计中子卵巢 (CHO) 细胞,以改善重组蛋白质的生产. 这种技术可以有效地生成基因淘汰CHO细胞系,提高治疗性抗体质量.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 细胞生物学 细胞生物学
- 基因工程是一种基因工程.
背景情况:
- 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞对于重组蛋白制造,特别是单克隆抗体至关重要.
- 在CHO衍生的抗体上的非人类糖分谱可能会对产品质量和治疗疗效产生负面影响.
- 目前在CHO细胞中使用的糖基工程方法耗时且劳动密集.
研究的目的:
- 引入一种新的,快速的方法,利用内核CRISPR输送来设计CHO细胞.
- 为了证明产生单基因和多基因淘汰CHO细胞系的可行性.
- 为有效和精确的基因改造验证CellEDIT方法.
主要方法:
- 利用FluidFM技术将CRISPR组件输入到单个CHO细胞.
- 目标基因包括BAX,DHFR和FUT8用于创建三重淘汰CHO-K1细胞系.
- 在没有限制稀释或细胞分类等传统方法的情况下,可以确保单克隆性.
主要成果:
- 在短时间内成功生成了三重淘汰赛CHO-K1细胞系.
- 在淘汰克隆中确认了向基因破坏和改变蛋白质表达.
- 证明了稳定的基因编辑,与无血清介质的兼容性和相当的转基因表达.
结论:
- 通过内核CRISPR输送,CellEDIT提供了一个快速有效的概念验证,用于通过内核CRISPR输送设计CHO细胞.
- 该技术简化了产生具有改进的糖化样式的单克隆抗体变体的生成.
- 这种方法有助于开发用于生物制药生产的先进CHO细胞系.
