功能性活性aflibercept的高效表达与设计的N-glycans
Tahereh Keshvari1,2, Stanislav Melnik1, Lin Sun1
1Institute of Plant Biotechnology and Cell Biology, Department of Applied Genetics and Cell Biology, University of Natural Resources and Life Sciences BOKU Vienna, 1190 Vienna, Austria.
Antibodies (Basel, Switzerland)
|April 23, 2024
概括
研究人员设计了植物以产生aflibercept,一种血管内皮生长因子受体 (VEGFR) 融合蛋白,通过受控的糖化. 这种基于植物的生产产生了大量的功能性aflibercept变体,为优化生物制药开发铺平了道路.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 葡萄糖生物学 葡萄糖生物学
背景情况:
- 阿弗利伯塞普特是一种关键的治疗融合蛋白,向VEGFR.
- 它在哺乳动物细胞中的产生导致复杂的糖化异质,使分析和优化复杂化.
- 阿弗利塞普特的N-糖化位点可以影响其结构和功能.
研究的目的:
- 开发一种以植物为基础的系统,用于生产具有受控N-糖基化配置的aflibercept.
- 为了表达和描述具有特定糖结构 (AFLI GnGn和AFLI Sia) 的aflibercept变体.
- 评估 glycoengineered aflibercept 变种的功能性活性和结合强度.
主要方法:
- 使用 *Nicotiana benthamiana* 进行aflibercept的短暂表达.
- 采用糖基工程策略引入终端GlcNAc和酸残留物.
- 进行了质谱测量,用于特定位点的糖化分析.
- 评估了产生的变种的VEGF165结合强度.
主要成果:
- 在植物叶子中实现了aflibercept变体的高水平表达 (2g/kg新鲜叶片材料).
- 证明了适当的二元组合和一致的特定位点的糖化模式.
- 在一些糖化位上确定了不完全占用.
- 对于AFLI GnGn和AFLI Sia,观察到与VEGF165相似的结合力,对于更多的化变体,结合力略有下降.
结论:
- 通过使用植物性系统,成功地生产了大量的功能性活性aflibercept.
- 证明了在植物表达的aflibercept中控制和设计N-glycosylation配置文件的能力.
- 这些发现支持进一步的研究,以优化生物制药生产,以量身定制的糖化.


