在大鼠中进行PCR基因定型的直肠抽样DNA采集协议

科学领域:

• 动物科学 动物科学
• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.

背景情况:

• 标准的DNA采集方法用于动物基因定型,如组织截肢,造成显著的不适和伤害.
• 一种最少的侵入性替代方案,即直肠擦拭,已被提出,但缺乏标准化,基于证据的协议.
• 有效和道德的DNA收集对于实验室动物研究至关重要.

研究的目的:

• 评估各种直肠抽取参数对聚合酶链反应 (PCR) 分析的DNA质量的影响.
• 开发和介绍一种可靠的协议,用于用直肠拭子对实验室大鼠进行基因定型.
• 建立一种快速,最小侵入性和可重复的动物基因定型方法.

主要方法:

• 研究了样本采集参数 (例如,痕数) 对DNA产量和质量的影响.
• 从直肠拭子获得的PCR结果与传统耳部剪切样本的PCR结果进行了比较.
• 评估了残留便对PCR放大成功的影响.

主要成果:

• 用2-8个直肠取取的样本产生了足够的DNA,用于使用PCR放大大约1800个基对的目标.
• 直肠抽样产生了PCR结果,其实用性与耳部剪切样本的PCR结果相当.
• 剩余便或细胞碎片的存在不会对PCR结果产生负面影响.

结论:

• 直肠抽样是一种有效的,最少的侵入性技术,用于获取DNA用于动物基因定型.
• 开发的协议允许快速 (3-5小时) 和可重复的老鼠子的基因型.
• 该方法为实验室动物的常规遗传分析提供了组织截肢的人道替代方案.