一个用于肉生物反应器的体外验证系统,使用永生卵管上皮细胞

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 细胞生物学 细胞生物学
• 动物科学动物科学

背景情况:

• 卵管上皮细胞 (OECs) 显示出作为治疗性蛋白质生产的生物反应器的潜力.
• 目前用于验证OEC衍生蛋白质生产的方法受到产生转基因后代的漫长过程的阻碍.
• 在体内应用之前需要一个有效的体外系统来预先验证蛋白质的生产.

研究的目的:

• 为了建立一个不朽的OEC (cOEC) 细胞系,用于体外预验证系统.
• 描述永生COECs的增殖,型和卵管特定基因表达.
• 用CRISPR/Cas9来增强cOEC系统,用于基因敲进和评估蛋白质分泌.

主要方法:

• 使用逆转录病毒载体介导的c-MYC瘤基因表达的OECs的永生化.
• 永生化coECs的表征,包括繁殖试验,型定型和对卵管特定基因 (OVA,OVM,LYZ,AVD,ESR1) 的定量PCR.
• 激素刺激 (DES,P4) 和CRISPR/Cas9介导的增强绿色光蛋白 (EGFP) 在卵蛋白 (OVA) 位点的内置.

主要成果:

• 成功建立了永生化的coECs,具有持续的增殖和正常的双胞胎型.
• 确认了关键卵巢特异性基因的表达,这些基因在DES和P4治疗时被上调.
• 产生的OVA EGFP敲入coECs分泌了EGFP和OVA蛋白质,在DES处理下分泌量增加.

结论:

• 永生化的coECs提供了一个强大的体外平台,用于在生物反应器中预验证治疗性蛋白质的生产.
• 开发的系统克服了传统体内验证的局限性,使得评估更快,更有效.
• 这一进步为简化开发用于制药蛋白生产的生物反应器模型奠定了基础.