基于质谱学的新型测定胺酸合成酶活性

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 酶学 是一种酶学.
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 乙基胺酸合成酶 (TS) 对于DNA合成至关重要,也是癌症化疗中的关键标.
• 测试TS活动的现有方法有局限性.
• 准确的TS活动测量对于临床和研究应用至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证一种新的基于液态染色学和质谱学 (LC-MS) 的测定法,用于测定甲基酸合成酶 (TS) 活性.
• 为了能够直接和具体测量TS反应产物,脱氧胺单酸盐 (dTMP).
• 在复杂的生物矩阵中评估开发的试验的实用性.

主要方法:

• 开发一种LC-MS方法来量化dTMP,TS酶活性产物.
• 使用老鼠肝脏同质物测试试剂.
• 优化辅基质 (5,10-甲基基酸盐) 度,以避免基质的抑制.
• 使用高质量分辨率的Orbitrap仪器监测副作用和叶酸池变化.

主要成果:

• 开发的LC-MS试验提供了直接和特定的TS活性测量.
• 在优化基质度下,TS活性与蛋白质含量和化时间 (长达60分钟) 线性.
• 测试TS活性为0.56±0.12 pmol/mg蛋白/分钟,与文献值一致.
• 该测试显示了叶酸池和核酸代谢的显著变化.

结论:

• 新型LC-MS测定是一种可靠且准确的方法来确定TS活性.
• 该试验适用于复杂样本 (包括临床材料) 中的TS活性常规监测.
• 这种方法比传统的光谱测量和基于放射性同位素的测试具有优势.