用于基于CRISPR/Cas9的基因编辑的Lipo-Xenopeptide多重复在超低剂量下

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 基因编辑技术的技术

背景情况:

• 开发高效和安全的传输系统对于CRISPR/Cas9基因组编辑应用至关重要.
• 响应pH的载体提供有针对性的输送和增强的细胞吸收.
• 基于Xenopeptide的系统为核酸输送提供了新的机会.

研究的目的:

• 评估用于基于CRISPR/Cas9的基因组编辑的新型双pH响应异载体.
• 选不同的载体设计,比例和类型,以获得最佳的基因编辑效率.
• 评估用于治疗基因编辑的选择载体的体外和体内性能.

主要方法:

• 用不同的脂氨基脂肪酸 (LAF) 和 succinoyl tetraethylene pentamine (Stp) 的比例合成和表征异载体.
• 选Cas9mRNA/sgRNA多复合体在针对Pcsk9,eGFP和mdx外子23的记者细胞系中的选.
• 在含有血清的介质中评估载体效率和对同源性基因编辑的评估.
• 在体内研究中将顶级载体制成多重复和脂质纳米粒子 (LNP).
• 静脉注射给小鼠,以评估心肌,骨肌和大脑组织中的体内基因组编辑.

主要成果:

• 识别具有高基因组编辑效率的U形和捆 (B2) 形脂类.
• 即使在高血清条件下,也可以达到亚纳米 EC50 度 (U 形为 0.4 nM sgRNA,B2 为 0.1 nM sgRNA).
• 使用同源导向基因编辑与联合交付的Cas9mRNA/sgRNA和ssDNA模板,证明了高达38%的eGFP转化为BFP.
• 配方载体在储存后显示出长期的物理化学和功能稳定性.
• 通过静脉注射的多重复合体或LNP成功调节了基因的体内编辑,调节了基因23外接在标组织中的拼接.

结论:

• 双pH响应异载体对CRISPR/Cas9传递非常有效.
• 已确定的U形和B2形载体在体外和体外表现出优越的基因编辑能力.
• 这些载体显示出治疗应用的潜力,包括用于肌肉发育不良等遗传疾病的体内基因修复.