对T7促进剂进行全面评估,以提高mRNA生产的产量和质量
Yustika Sari1, Sara Sousa Rosa1,2,3, Jack Jeffries1
1Department of Biochemical Engineering, University College London, Gordon Street, London, WC1E 6BT, UK.
Scientific reports
|April 26, 2024
概括
为了优化mRNA疫苗制造,研究人员修改了DNA序列,以提高mRNA产量高达14g/L,同时将双链RNA (dsRNA) 副产品减少30%. 这提高了疫苗生产的可扩展性和成本效益.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 疫苗开发 疫苗开发
背景情况:
- 无细胞系统提供可扩展和灵活的mRNA疫苗制造.
- 标准工艺产生2-5g/L的mRNA,优化达到12g/L.
- 提高产量可以提高不需要的双链RNA (dsRNA) 副产品水平,需要昂贵的净化.
研究的目的:
- 为了提高mRNA生产产量,同时最大限度地减少dsRNA副产品的形成.
- 为了改善转录,研究T7RNA聚合酶促进体下游的序列修改.
- 通过减少净化需求,使成本有效的mRNA制造成为可能.
主要方法:
- 用富含AT的序列修改了T7促进子下游的DNA序列.
- 评估了转录性能和mRNA产量.
- 量化dsRNA副产品水平和评估EGFP蛋白表达.
主要成果:
- 在45分钟的反应时间内,获得的mRNA产量高达14g/L.
- 与野生型T7促销者相比,鉴定出降低dsRNA副产品水平高达30%的变体.
- 在修改变体和野生类型之间观察到类似的EGFP蛋白表达水平.
结论:
- 优化非编码区域,特别是T7促进体下游的优化,显著影响mRNA生产产量和质量.
- 序列修改提供了一种可行的策略,可以增加mRNA产量,同时减少dsRNA,从而实现更经济的制造.
- 这种方法支持开发更高效,更具成本效益的mRNA疫苗生产流程.
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