通过多种策略,可以改善烯酸乙酶的细胞外分泌和活性
Susu Zhang1, Jiapeng Wang2, Yaohan Liu3
1College of Life Science, Shandong Normal University, Jinan 250358, PR China; Dongying Key Laboratory of Salt Tolerance Mechanism and Application of Halophytes, Dongying Institute, Shandong Normal University, Dongying 257000, PR China.
这项研究通过使用遗传优化和蛋白质工程,增强了大肠杆菌中细胞外铁乙酶的产生. 改造的酶显著提高了产量和活性,为工业应用铺平了道路.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 酶工程是什么? 酶工程是什么?
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 酸乙酶 (FAE) 是有价值的,但其产量和活性较低.
- 大肠杆菌中FAE的细胞外分泌具有挑战性.
- 之前的研究表明,E. coli中的Lactobacillus amylovorus FAE具有细胞外分泌的潜力.
研究的目的:
- 为了最大限度地提高大肠杆菌中FAE的细胞外产量.
- 通过蛋白质工程来增强FAE活动.
- 建立工业FAE应用的基础.
主要方法:
- 对大肠杆菌的FAE基因的Codon优化.
- 遗传修饰包括T7促进子级联,5' UTR 替代,N端突变和分泌辅因子的共同表达.
- 针对FAE的局部导向突变发生,以改善基质亲和力和催化效率.
主要成果:
- 阴茎优化增加了41.97%的细胞外分泌.
- 进一步的遗传策略将分泌量提高了高达36.46%.
- 突变Fae-Q134T和Fae-Q198A分别提高了4.62倍和5.42倍的催化效率.
- 总体而言,细胞外FAE活动从2013.70 U/L增加到10,349.04 U/L.
结论:
- 多种策略显著增强了E. coli中的细胞外FAE产量和活性.
- 工程 FAE 证明了具有成本效益的工业生产潜力.
- 这项工作为开发各种应用的FAE提供了一个强大的平台.
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