在现场进行细胞研究的相关冷显微管道
Anna Pepe1, Johannes Groen2, Chiara Zurzolo1
1Membrane Traffic and Pathogenesis, Institut Pasteur, Paris, France.
Methods in cell biology
|May 5, 2024
概括
相对应的冷光和电子显微镜 (cryoCLEM) 可以在没有样本稀释的情况下进行细胞结构研究. 两种新的冷仪 (cryoCLEM) 协议为高分辨率成像提供了新的途径,可以在原始状态下对细胞目标进行高分辨率成像.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 结构生物学 结构生物学
- 显微镜的使用方法
背景情况:
- 相对冷光和电子显微镜 (cryoCLEM) 对于高分辨率可视化细胞结构至关重要.
- 在复杂的细胞环境中识别特定的目标是冷电子断层扫描 (cryoET) 中的一个挑战.
- 现有的冷化学制方法通常依赖于冷聚焦离子束 (cryo FIB) 研磨,这可能具有破坏性.
研究的目的:
- 为两种避开冷FIB削的冷CLEM方法提出详细的协议.
- 允许在单细胞水平上对附着细胞进行现场研究.
- 在未被干扰的细胞环境中对光标记的细胞结构进行成像.
主要方法:
- 开发了一种完整的冷管道,用于冷水合样本的同时光和电子成像.
- 建立了一种混合型的cryoCLEM方法,涉及室温光成像,随后是快速结和cryoEM成像.
- 应用了这些方法来图像结构,如细胞突起和外围细胞器官,厚度高达500nm.
主要成果:
- 成功演示了两种绕过冷FIB削的冷CLEM协议.
- 启用高分辨率的特定细胞点的成像在它们的原生,未被干扰的状态.
- 便于对外围细胞结构和有机体进行可视化,而不会损害样本.
结论:
- 本文所介绍的冷CELEM协议为高分辨率细胞成像提供了替代的,非破坏性的方法.
- 这些方法提高了在现场研究细胞结构的能力,特别是在外围地区.
- 这些方法对于在没有侵入性稀释程序的情况下,在附着细胞中研究光标记的目标是有价值的.
