通过组合策略增强Komagataella phaffii中非特异性过氧酶的表达
Li-Xiang Zhao1,2, Shu-Ping Zou1,2, Qi Shen1,2
1Key Laboratory of Bioorganic Synthesis of Zhejiang Province, College of Biotechnology and Bioengineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou, 310014, People's Republic of China.
Applied microbiology and biotechnology
|May 6, 2024
概括
通过增加基因拷贝数和共同表达的伴侣来实现Cyclocybe aegerita非特异性过氧酶 (AaeUPO) 突变的增强表达. 这导致酶活性显著增加,为工业应用铺平了道路.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 酶工程是什么? 酶工程是什么?
- 工业微生物学 工业微生物学
背景情况:
- 来自Cyclocybe aegerita (AaeUPO) 的非特异性过氧酶 (UPO) 使用过氧化催化C-H键氧化.
- 以前的努力集中在通过定向进化,促进剂和分泌来增强AaeUPO活动.
研究的目的:
- 为了进一步增强改进的AaeUPO突变体 (PaDa-I) 的表达和活性.
- 研究策略,包括增加基因拷贝数量,陪伴者共同表达和优化培养条件.
主要方法:
- 基因修饰以增加表达 磁带复制号码.
- 作为一个陪伴者,蛋白质二硫化物异构酶的共同表达.
- 优化发酵培养条件的优化.
- 使用2.2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) 的酶活性测定.
- 使用R-2-phenoxypropionic acid进行区域选择性化试验.
主要成果:
- 一个带有~3个基因拷贝和共表达蛋白二硫化异构酶的菌株显示,体积酶活性增加了10.7倍.
- 优化的培养条件进一步提高了体积酶活性48.7%,达到117.3 U/mL.
- 该PaDa-I催化域证明了R-2-基酸的区域选择性氧化.
结论:
- 增加基因拷贝数和共同表达蛋白二硫化异构酶显著增强了PaDa-I的分泌和活性.
- 优化的发酵条件对于最大限度地提高酶的生产至关重要.
- 设计的PaDa-I显示出在选择性基化反应中的工业应用潜力.
