使用基因组编辑,可持续地生产多重和功能性重组人体脂肪蛋白

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 内分泌学 在内分泌学.
• 蛋白质生产 蛋白质生产

背景情况:

• 复合人体脂肪内素 (hADPN) 生产面临的挑战与传统的系统产生活跃的中高分子量 (MMW/HMW) 形式.
• 此前曾提出基因组编辑用于高效的多重基因hADPN生产.
• 在这个系统中,跨代的多重体hADPN表达的一致性需要进一步研究.

研究的目的:

• 为了研究基因组编辑的多分子hADPN生产的世代一致性.
• 将在中产生的hADPN多重体形式与来自其他系统的hADPN多重体形式进行比较 (HEK 293,高五细胞).
• 为了确定卵管内HMWhADPN生产的最佳地点,并确认EW衍生的hADPN的功能.

主要方法:

• 生产和分析后续几代卵蛋白 (OVA) ADPN敲进.
• 使用SDS-PAGE等技术对卵白 (EW),血清,HEK 293和High-Five细胞的hADPN形式进行比较分析.
• 在卵管中对内分泌网膜伴侣基因的转录表达分析.
• 在人静脉内皮细胞 (HUVECs) 中对EW衍生的hADPN进行功能分析,以评估脂滴减少和基因表达变化.

主要成果:

• 随后的几代ADPN试验稳定地产生了多聚合物hADPN,大约有26%的HMW形式 (每只母0.59 mg/mL).
• 源自EW的hADPN主要由六合体和HMW形式组成,与源自血清的hADPN相似,而源自细胞的hADPN显示出更多的三元体.
• 在卵管中特定的ER陪伴基因的升级表明它是最佳的生产地点. 在HUVEC中,EW-hADPN显著降低了脂质积累.

结论:

• 经过基因组编辑的提供了一个一致而稳定的平台,可以跨世代生产功能多重体hADPN.
• 卵管大部位被确定为HMW hADPN生产的最佳地点.
• 生物反应器显示出产生各种高价值蛋白质的巨大潜力,包括治疗性糖蛋白.