通过LC-MS改进完整的和蛋白质定量:打击分析剂吸附的有害影响
EmmaRae L Murphy1, Andrew P Joy1, Rodney J Ouellette1
1Atlantic Cancer Research Institute Moncton New Brunswick Canada.
Analytical science advances
|May 8, 2024
概括
在质谱学中,分析物的吸附和非线性反应阻碍了准确的和蛋白质量测量. 使用低结合性瓶子和吸附竞争剂显著提高了生物标志物发现的信号灵敏度和线性.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 生物化学 生物化学
- 质谱测量质量谱测量
背景情况:
- 使用液态染色体质谱法 (LC-MS) 量化和蛋白质,假定信号响应是线性的.
- 在低度和高度下,分析剂对表面的吸附和非线性反应会损害量化准确性.
- 在低蛋白度下实现线性对于生物标志物的发现和验证至关重要.
研究的目的:
- 为了证明低结合材料和吸附竞争者的好处,以改善LC-MS量化线性.
- 为了应对不同度的和蛋白质信号响应方面的挑战.
- 为了提高在质谱学中低级分子检测的灵敏度.
主要方法:
- 使用了商业低粘合微离心管和LC瓶.
- 测试了一种27米尔 (Vn96) 和完整的蛋白质 (阿波米格洛宾,碳酸无水酶).
- 采用吸附竞争对手 (碳酸无水素,无素) 并分析了在线酶性消化.
主要成果:
- 实现了Vn96,阿波米oglobin (与竞争对手) 和碳酸 anhydrase (与竞争对手) 的线性校准曲线.
- 在两到三个数量级上表现出线性反应.
- 报告的检测极限范围从0.33到19 fmol/μL.
- 显示的低结合性小瓶可以防止消化后的吸附.
结论:
- 低结合性小瓶和吸附竞争者显著提高了LC-MS中的信号灵敏度和线性.
- 这些方法对于准确量化和蛋白质至关重要,特别是在低度下.
- 该研究提供了一种全面的方法,以克服质谱学中分析剂吸附挑战.
