使用自诱导系统在埃舍里希亚大肠杆菌BL21星 (DE3) 中表达可溶性莫洛尼小鼠白血病病毒逆转录酶

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 蛋白质表达方式

背景情况:

• 自动诱导系统提供了一种控制大肠杆菌蛋白质生产的方法,无需外部诱导.
• 优化异质蛋白表达对于生物技术应用至关重要.

研究的目的:

• 为优化Moloney小鼠白血病病毒衍生逆转录酶 (MMLV-RT) 在大肠杆菌中异质表达的自诱导条件.
• 为了比较自动诱导与MMLV-RT生产的传统诱导方法的产量,活性和成本效益.

主要方法:

• 对四种自诱导介质的查,以确定大肠杆菌BL21 Star (DE3) 中MMLV-RT过度表达的最佳条件.
• 化96小时以达到最大的MMLV-RT产量.
• 使用不移金属亲和染色学 (IMAC) 净化MMLV-RT.

主要成果:

• 帝国学院的自诱导介质产生了最高的MMLV-RT过度表达.
• 该酶主要存在于细胞溶解物的可溶性分量中.
• 纯化的MMLV-RT表现出629.4U/mg的特异活性.
• 与传统诱导相比,自诱导的结果是酶产量比传统诱导高27.8%,尽管化时间较长,特异活性较低.

结论:

• 自动诱导为生产MMLV-RT提供了一种具有成本效益的方法,产量高于IPTG诱导.
• 建议进一步优化生物处理,以提高通过自诱导产生的MMLV-RT的质量.