介质的选择会影响PBMC量化,细胞大小和下游呼吸分析
Ida Bager Christensen1, Lucas Ribas1, Maria Mosshammer2
1Xlab, Department of Biomedical Sciences, University of Copenhagen, Copenhagen, Denmark.
Mitochondrion
|May 8, 2024
概括
选择正确的介质对于精确的外周血液单核细胞 (PBMCs) 高分辨率呼吸计 (HRR) 至关重要. 由于细胞数量增加和聚合,MiR05介质可能导致低估氧气流量.
科学领域:
- 细胞生物能学 细胞生物能学
- 呼吸测量技术的使用方法
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- 高分辨率呼吸计 (HRR) 对于评估细胞能量代谢至关重要.
- 缺乏为HRR准备外周血液单核细胞 (PBMC) 的标准化方案.
- 呼吸计介质的选择可以显著影响细胞数量,大小和生物能量测量.
研究的目的:
- 研究四种不同的介质 (MiR05,PBS,RPMI,Plasmax) 对PBMC制剂和随后的HRR的影响.
- 使用HRR确定最佳媒介,以准确评估完整的PBMC生物能源,使用HRR.
- 为PBMCs提供支持开发标准化HRR协议的数据.
主要方法:
- 在四种不同的介质中准备和分析完整的PBMC:MiR05,PBS,RPMI和Plasmax.
- 对于每个介质,确定了PBMC数量和大小.
- 用Oxygraph-O2k仪器使用高分辨率呼吸计 (HRR) 测量氧气 (O2) 流量.
- 确定了Plasmax和PBS的氧溶性因子.
主要成果:
- 在MiR05中重新悬浮PBMC导致细胞计数比PBS或Plasmax高21%.
- MiR05介质导致细胞尺寸缩小,细胞聚合增加.
- 在MiR05中较高的细胞数量导致HRR期间低估了O2流量.
- 发现Plasmax,PBS和RPMI对于完整的PBMC的HRR比MiR05更适合.
结论:
- 介质的选择显著影响PBMC数量,大小,聚合和随后的HRR测量.
- 由于对细胞数量和O2流量的影响,不建议对完整的PBMCs的HRR使用MiR05.
- 建议Plasmax,PBS或RPMI作为完整的PBMC标准化HRR协议的更合适的介质.
- 鼓励对完整的PBMC进行HRR协议的进一步优化和标准化.
