在冷复合酶聚合酶放大中获得了前所未有的稳定性,使用来自Thermotoga海洋的热稳定型酸盐激酶

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 重组酶聚合酶放大 (RPA) 是一种异热DNA放大方法.
• 在现场应用需要稳定,冷化RPA试剂.
• 目前的RPA配方经常使用中性酶,限制试剂的稳定性.

研究的目的:

• 调查Thermotoga maritima中热稳性酸盐激酶 (Tma-PK) 在RPA中作为ATP再生酶的使用.
• 评估Tma-PK对液体和冷化RPA试剂性能的影响.
• 为了确定热稳性酶是否更适合冷化RPA试剂配方.

主要方法:

• 从Thermotoga maritima中分离和净化了Tma-PK.
• 在大肠杆菌中表达的Tma-PK.
• 与人类PK相比,评估了Tma-PK的热稳定性.
• 在液体和冷化RPA配方中加入Tma-PK.
• 将RPA试剂与Tma-PK的性能与人类PK进行了比较.

主要成果:

• Tma-PK显示出比人类PK更高的热稳定性.
• 含有Tma-PK的液体RPA试剂的性能与人类PK的试剂相当.
• 与Tma-PK配制的冷化RPA试剂显示出增强的性能.
• 热稳定酶被认为对冷化RPA优越.

结论:

• 来自Thermotoga maritima的热稳性pyruvate kinase是一种可行的ATP再生酶,用于RPA.
• 在RPA配方中使用热稳定酶,如Tma-PK,可以提高冷化试剂的稳定性和性能.
• 热稳定酶是开发强大,持久的冷解RPA套件的首选组件.