使用HEK293悬浮电池生产高产量的亚地诺相关载体批量
Kimberly L Pietersz1, Paul J H Nijhuis1, Matthijs H M Klunder1
1Laboratory for Regeneration of Sensorimotor Systems, Netherlands Institute for Neuroscience, Royal Netherlands Academy of Arts and Sciences (KNAW).
Journal of visualized experiments : JoVE
|May 13, 2024
概括
开发一种基于悬浮的细胞培养方法,用于腺相关病毒载体 (AAV) 显著减少了劳动和时间. 与传统的粘附方法相比,这种新协议产生了3-9倍的AAV载体,保持了体内传导效率.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 神经科学是一个神经科学.
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 腺相关病毒载体 (AAV) 对于中枢神经系统 (CNS) 研究至关重要.
- 像AAV.PHP.eB这样的创新性体可以通过小鼠的静脉注射来实现中枢神经系统转导.
- 目前使用附着HEK293T细胞的AAV生产是劳动和材料密集型,需要高标位的中枢神经系统应用.
研究的目的:
- 开发一种更有效的协议,用于腺相关病毒载体的生产.
- 为了比较使用悬浮基与附着细胞培养方法生产的AAV的产量和转导效率.
- 为研究应用优化AAV生产,减少时间和劳动力.
主要方法:
- 开发了一种基于悬浮的细胞培养协议,用于在形管中产生腺相关病毒载体.
- 从悬浮培养物 (使用聚乙胺或TransIt试剂) 与传统粘附HEK293T细胞培养物进行了AAV产量和转导效率的比较.
- 使用二醇梯度超离心,然后进行缓冲区交换和度的纯化AAV载体.
主要成果:
- 使用TransIt的基于悬浮的方法产生了最高的基因组总拷贝 (2.4 x 10^13 GC),大约是附着方法 (2.6 x 10^12 GC) 的9倍.
- 使用聚乙烯胺的悬浮方法产生了7.7 x 1012 GC,大约是粘附方法的3倍.
- 在使用附着与悬浮细胞系统生成的载体之间没有观察到体内中枢神经系统传导效率的显著差异.
结论:
- 与附着方法相比,基于细胞的悬浮HEK293腺相关病毒载体生产协议提供了显著更高的产量 (3-9倍).
- 这种悬浮协议减少了载体生产所需的时间和劳动力.
- 开发的方法提供了一个更有效和可扩展的方法,用于生成用于研究目的的AAV向量,利用商用组件.
