来自沙门氏菌的3型分泌系统针单体的表征和工程通过构建和选一个综合性突变遗传学图书馆

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 分子生物学分子生物学
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 细菌蛋白质的生产通常需要细胞溶解和复杂的净化,限制了商业应用.
• 细菌中的蛋白质分泌提供了一个更简单的净化替代方案,但其产量较低.
• 工程分泌装置,特别是3型分泌系统 (T3SS),是一个有前途的策略,以提高蛋白质分泌量.

研究的目的:

• 研究PrgI蛋白质的结构如何影响3型分泌系统 (T3SS) 的分泌能力.
• 为了确定增强T3SS分泌标位的突变.
• 为PrgI蛋白开发一个分泌适应性景观 (SFL).

主要方法:

• 使用一重组构建了PrgI蛋白的综合性编码子突变性库.
• 通过测量性酸酶分泌量,选了图书馆的功能T3SS组装和分泌量.
• 使用高通量活动试验量化分泌水平.

主要成果:

• 开发了PrgI蛋白质的第一个分泌健身景观 (SFL).
• 确定了导致增强T3SS分泌的特定突变.
• 发现了用于构建功能T3SS的新设计规则,并确定了超分泌突变物.

结论:

• 了解T3SS PrgI针的结构功能关系对于设计更高分泌量度至关重要.
• 这项工作提供了通过构建健身景观来设计复杂蛋白质组件的蓝图.
• 已识别的超分泌突变物和设计规则可以促进细菌蛋白质生产和基于T3SS的应用.