使用微流体光激活滴状选器对限制性内核酶进行高通量直接选,该选器基于大肠杆菌中的SOS反应

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.
• 基因组学就是基因组学.

背景情况:

• 限制性内核酶 (RE) 是DNA裂变的重要分子生物学工具.
• 从自然资源中发现新的RE对于扩大研究和工业应用至关重要.
• 目前寻找RE的方法往往是低效的,特别是对于不能培养的生物.

研究的目的:

• 开发和验证一种新的,有效的战略,用于发现新的限制性内核酶 (RE).
• 利用高吞吐量微流体平台,快速选 RE.
• 证明该策略对特定的RE基因 (如XbaI) 的丰富的有效性.

主要方法:

• 通过SOS响应构建了一个宿主细菌细胞,将RE基因型与β-银酸酶表达联系起来.
• 使用高通量微流体平台在微流体滴中隔离,检测和分类REs,每秒约800滴.
• 使用开发的平台对 XbaI 基因进行了选,对构建的库进行了选.

主要成果:

• 在1小时内,在单次分类中实现了目标XbaI基因的90倍丰富.
• 展示了该平台对基因毒性标的高通量查的能力.
• 与传统的RE选技术相比,该方法显著提高了效率.

结论:

• 拟议的直接查策略提供了一种有效的方法,可以从自然的样本中发现可取的RE,包括不可培养的样本.
• 这种方法可以适应各种基因毒性标的高通量查.
• 该技术推动了对新型限制酶的研究,有利于分子生物学和生物技术.