验证用于偶然病毒检测的下一代测序方法:在多个细胞系中证明灵敏度
Rebecca A Bova1, Leyla Diaz1, Scott Eubank1
1MilliporeSigma, 14920 Broschart Rd., Rockville, MD, 20850, USA.
概括
下一代测序 (NGS) 为检测细胞库中的病毒污染物提供了一个经过验证的替代方案,取代了传统的基于动物的方法. 这项研究为生物制造应用建立了一个可靠的NGS方法,具有定义的检测极限.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 病毒学 病毒学
- 基因组学就是基因组学.
背景情况:
- 下一代测序 (NGS) 越来越多地被用于病毒安全测试,与国际协调理事会 (ICH) 修订的指南保持一致.
- 传统的基于动物的病毒安全方法正在被先进的分子技术所取代.
研究的目的:
- 验证一种下一代测序 (NGS) 方法,用于检测细胞库中的RNA和DNA病毒.
- 建立质量标准,并在整个测序和分析管道中确保数据完整性.
- 为了确定生物制造细胞系中偶然病毒的检测极限 (LOD).
主要方法:
- 验证NGS过程中的每个步骤,包括测序和生物信息分析.
- 开发一种不可知分析算法,用于识别病毒序列.
- 在常见的生物制造细胞类型中应用验证的系统来确定模型病毒的LOD.
主要成果:
- 通过确定的标准实现了一致的测序数据质量.
- 分析算法有效地识别了特定于病毒的序列.
- 经过验证的NGS方法确定了模型病毒的一般LOD,从1E+03到1E+04的基因组副本.
结论:
- 经过验证的NGS方法为传统的病毒检测方法提供了强大的和合适的替代方案.
- 这种方法提高了生物制造中使用的细胞库的安全性和可靠性.
- 建立的LOD为偶然的毒剂测试提供了定量基准.
