用基于活动的蛋白质剖析来确定乙蛋白硫酶-1作为多酸盐降解宿主细胞蛋白在单克隆抗体配方中,使用基于活动的蛋白质剖析

科学领域:

• 生物制药科学 生物制药科学
• 蛋白质化学 蛋白质化学
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 聚酸盐 (PS) 在配方中对单克隆抗体 (mAb) 稳定性至关重要.
• 低丰富度的残留宿主细胞蛋白 (HCP),特别是水解酶,可以降解PS.
• 这种降解会影响mAb疗法的保质期和疗效.

研究的目的:

• 在一个有问题的mAb配方中,确定负责PS降解的特定HCP.
• 为了验证已识别的医疗保健专家在PS分解中的作用.
• 探索减轻PS降解的方法.

主要方法:

• 基于活动的蛋白质分析 (ABPP) 与质谱学相结合.
• 重组蛋白表达和活性测定.
• 对PS降解产品和HCP水平的分析.
• 使用特定的APT1抑制剂的抑制研究 (ML348,ML211).

主要成果:

• 乙蛋白化酶-1 (APT-1) 被确定为主要的PS降解HP.
• 在APT1水平和PS降解速度之间观察到直接相关性.
• 发现APT1与特定的mAb.Ab共同净化.
• 使用APT1特异性抑制剂成功抑制了PS降解.

结论:

• APT-1是一个关键的HCP,有助于在mAb配方中的PS降解.
• ABPP提供了一种简化方法,用于识别参与配方不稳定的关键HCP.
• 这些发现支持设计质量原则,用于开发稳定的生物制药产品.