在大肠杆菌中scFv-anti-CHIKV-E2的表达与伴侣共同表达,并通过电化学免疫传感器进行其功能测定
Shabarni Gaffar1,2,3, Siti Hesti Nurbayanti1, Yeni Wahyuni Hartati1
1Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Universitas Padjadjaran, Bandung, Indonesia.
Journal of immunoassay & immunochemistry
|May 22, 2024
概括
同表达的伴奏剂显著增强了大肠杆菌中可溶性单链可变片段 (scFv) 的产生. 这种改进的scFv对于在电化学免疫传感器中检测 Chikungunya 病毒 (CHIKV) E2 蛋白有效.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
- 免疫传感器 免疫传感器
背景情况:
- 单链可变片段 (scFvs) 是有价值的诊断工具,但由于蛋白质错误折叠和包含体的形成,在大肠杆菌中产生具有挑战性.
- 优化scFv生产对于开发敏感的诊断试验至关重要.
研究的目的:
- 为了增强抗CHIKV E2 scFv在Origami B Escherichia coli中的可溶性表达.
- 为了研究共同表达GroEL,GroES和Trigger Factor的护卫者的有效性,以改善scFv的溶解性.
- 为了评估产生的scFv在用于CHIKV检测的电化学免疫传感器中的性能.
主要方法:
- 在Origami B Escherichia coli中,抗CHIKV E2 scFv与三个伴侣 (GroEL,GroES,触发因子) 的同时表达.
- 使用Ni-NTA染色学净化scFv.
- 通过电化学免疫传感器,微分脉冲电量计 (DPV) 和扫描电子显微镜 (SEM) 进行功能性表征.
- 使用Box-Behnken设计优化实验条件.
主要成果:
- 陪伴剂的联合表达使可溶性scFv产量增加了大约5倍 (从54.405μg/mL到220.097μg/mL).
- 反CHIKV-E2 scFv在电化学免疫传感器中显示出有效的检测.
- 达到0.74048 ng/mL的检测极限和2.24388 ng/mL的量化极限用于CHIKV-E2.
结论:
- 陪伴体的共同表达是一种可行的策略,以克服在大肠杆菌中可溶性scFv生产的挑战.
- 开发的抗CHIKV-E2 scFv是基于电化学免疫传感器的CHIKV诊断的一个有前途的生物受体.
- 这种方法促进了scFvs在疾病检测的各种免疫测试方法中的应用.
