在大肠杆菌和其易于生产的Escherichia coli中,复合人间白蛋白-2的可溶性表达
Minhui Zhang1, Yongxiang Zheng1, Sa Wang1
1Department of Biopharmaceutics, Key Laboratory of Drug-Targeting and Drug Delivery System of the Education Ministry, Sichuan Engineering Laboratory for Plant-Sourced Drug and Sichuan Research Center for Drug Precision Industrial Technology, West China School of Pharmacy, Sichuan University, Chengdu, 610041, China.
在大肠杆菌中产生复合人间白血素-2 (rhIL-2) 是具有挑战性的. 一种新的SUMO融合策略使得有效的可溶性表达和简单的生物活性rHIL-2净化成为可能.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 蛋白质表达方式
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 在大肠杆菌中,复合人间白蛋白-2 (rhIL-2) 的产生受到其疏水性和包容体形成的阻碍.
- 对于rhil-2纳入体的传统重新折叠方法是低效和复杂的.
- 开发可溶和高效的rhIL-2表达策略对于生物技术应用至关重要.
研究的目的:
- 开发一种有效的方法,用于在大肠杆菌中可溶性表达和容易产生复合人间白蛋白-2 (rhIL-2).
- 为了克服与rhIL-2疏水性和包容体形成相关的挑战.
主要方法:
- 一个双合的SUMO融合伙伴 (His-2SUMO) 被设计并与rhIL-2的N端融合.
- 融合蛋白 (His-2SUMO-rhIL-2) 在大肠杆菌Origami B (DE3) 主体中得到表达.
- 使用Ulp1蛋白酶切割SUMO标签,随后使用两步Ni-NTA亲和染色法进行净化.
主要成果:
- 他的-2SUMO-rhIL-2融合蛋白主要以可溶性形式表达.
- 通过高效地去除合伙伴和简单的净化,可以获得高纯度和回收的rhIL-2.
- 纯化的rhIL-2呈现出紧,有序的结构,并保持了与商业配方相比的生物活性,尽管存在于可溶性聚合物.
结论:
- SUMO融合策略显著提高了可溶性表达,并简化了E. coli中rHIL-2的产生.
- 这种方法提供了一个更有效和简单的方法,与传统的包容体重新折叠技术相比.
- 由此产生的可溶性rhIL-2聚合物保留了生物活性,为治疗应用提供了可行的替代方案.
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