来自大肠杆菌的重组组织等离子体激活剂 (Reteplase) 的异质表达,净化和单步高效重新折叠
Meha Bhatt1, Haidar Abbas Masi1, Amrutlal Patel1
1Gujarat Biotechnology Research Centre, Department of Science & Technology, MS Building, 6th Floor, GH Road, Sector - 11, Gandhinagar, Gujarat, 382011, India.
Protein expression and purification
|May 23, 2024
概括
这项研究优化了复合组织类型等离子体激活剂 reteplase (rPA) 的产生和净化. 使用渐进透析方法的缓慢重新折叠成功地产生了具有高产量和纯度的活性rPA,用于潜在的治疗用途.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 雷特酶 (重组等离子体激活剂,rPA) 是一种改性组织型等离子体激活剂 (tPA),具有改善的药理动力学特性.
- 目前用于rPA生产的方法需要优化产量和生物活性.
研究的目的:
- 优化复合组织类型等离子体激活剂 (reteplase,rPA) 的生产和净化过程.
- 为了实现重新折叠的rPA的高产量和生物活性.
主要方法:
- 转基因cDNA被PCR放大,克隆成大肠杆菌表达载体,并表达在罗塞塔-gami2大肠杆菌中.
- 纳入体被溶解,净化,并使用缓慢重新折叠使用渐进透析 (SRGD) 与谷氨氧化还原缓冲器重新折叠.
- 蛋白质的纯度,同质性,重新折叠效率和血栓解压活性使用SDS-PAGE,西式涂抹,质谱学,循环二元化,纤维素板测定和体外凝块溶解测定进行了评估.
主要成果:
- 通过单步溶解,净化和重新折叠过程,成功产生了活性回位酶 (rPA).
- 在SRGD方法中,每50毫升培养物中产生4.26毫克的活性重新折叠蛋白质,证明了高的重新折叠效率.
- 通过SDS-PAGE,Western blotting和质谱学证实了重新折叠的rPA的纯度和同质性.
结论:
- 使用SRGD的优化协议显著提高了 reteplase的产量和重新折叠效率.
- 这种方法提供了一种可行的方法,用于产生潜在的治疗应用的活性回位酶.
- 这种特征的 reteplase 呈现出有前途的血栓溶解潜力.
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