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Updated: Jun 25, 2025
08:31
Antibody-Free Assay for RNA Methyltransferase Activity Analysis
Published on: July 9, 2019
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基于SAH рибо开关的通用甲基转移酶酶性试验的开发和验证
Ha Pham1, Meera Kumar2, Anibal Ramos Martinez1
1BellBrook Labs, Madison, WI, USA.
SLAS discovery : advancing life sciences R & D
|May 24, 2024
概括
一个新的测定方法使用分裂的RNA胺体来检测S-adenosylhomocysteine (SAH),这是甲基化反应的产物. 这种方法可以对SAH进行敏感,均的检测,以发现甲基转移酶抑制剂.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 表观遗传学 在表观遗传学中,表观遗传学是指表观遗传学.
背景情况:
- 蛋白质和核酸甲基化是重要的表观遗传过程.
- 甲基转移酶 (MT) 抑制剂正在积极寻求治疗应用.
- 检测S-adenosylhomocysteine (SAH),SAM-依赖甲基化的通用产品,比检测特定的甲基化事件提供了优势.
研究的目的:
- 开发一种敏感和均的检测方法来检测SAH.
- 克服SAH检测方面的挑战,包括区分SAH和SAM,以及在存在多余的SAM时检测低纳米分子度.
- 创建一个用于甲基转移酶查和分析的通用平台.
主要方法:
- 工程师将一个SAH感应RNA体 (riboswitch) 分成两个片段.
- SAH结合诱导了三元复合物的组合,产生光极化 (FP) 和时间解析的Förster共振能量转移 (TR-FRET) 信号.
- 开发了AptaFluorTM SAH甲基转移酶试验,基于这种分裂的 рибо开关配置.
主要成果:
- 该AptaFluor试验可在低于10nM的度下稳定检测SAH,并且在一夜之间保持信号稳定.
- 该测试与各种甲基转移酶基质兼容,包括基质子,核体,DNA和RNA.
- 对于S-adenosylmethionine (SAM) (<1μM) 的低迈凯利斯-门常数 (Km) 的甲基转移酶的证明效用.
- 通过对1,280种化合物进行针对SARS-CoV-2RNA封闭酶 (nsp14) 的查,为高通量查 (HTS) 验证.
结论:
- 该AptaFluor试验为选和分析甲基转移酶提供了一个通用的平台.
- 允许在生理学上相关的S-adenosylmethionine (SAM) 度下直接,均地检测SAH.
- 通过在复杂的生物样本中敏感检测SAH,方便发现甲基转移酶抑制剂.
