寄生虫衍生微RNA let-7-5p 基于滚动循环放大辅助的CRISPR/Cas9p检测甲基沙
Liqun Wang1, Guiting Pu1, Tingli Liu1
1State Key Laboratory for Animal Disease Control and Prevention, Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province, National Para-reference Laboratory for Animal Echinococcosis, Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences (CAAS), Lanzhou, China.
一种使用滚动循环放大 (RCA) 辅助的CRISPR/Cas9的新诊断方法可以早期检测甲基沙病. 这种寄生虫衍生微RNA (miRNA) 试验显示了动物感染早期检测的高灵敏度和特异性.
科学领域:
- 寄生虫学的寄生虫学
- 分子诊断学 分子诊断学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 由 cestode 幼虫引起的甲基沙病对动物健康,畜牧业和公共健康构成重大风险.
- 目前的诊断方法缺乏在感染宿主中区分各种 cestode 衍生微RNA (miRNA) 的特异性.
- 对于敏感,特异性和成本效益高的分子诊断,对于早期检测甲基沙病有着至关重要的需求.
研究的目的:
- 开发一种新的,高度灵敏的和特定的分子诊断试验,用于甲基沙病.
- 为了利用寄生虫衍生的miRNA,let-7-5p作为生物标志物用于早期检测囊病和球菌病.
- 评估诊断性能和与寄生虫负担的相关性.
主要方法:
- 开发一种滚动循环放大 (RCA) 辅助的CRISPR/Cas9检测方法,针对寄生虫特定的miRNA let-7-5p.
- 使用qPCR,RCA和RCA-CRISPR/Cas9试验的检测极限 (LOD) 和特异性的比较.
- 诊断敏感度和特异性的评价来自感染和对照动物的151个血样本.
主要成果:
- RCA辅助的CRISPR/Cas9测定显示出高的特异性,区分cestode let-7与其他物种,其LOD为10 aM.
- 诊断灵敏度和特异性分别为 100% 和 97.67% 的子囊,和 100% 和 100% 的老鼠 Echinococcus multilocularis 感染.
- 血let-7-5p水平与寄生虫负担正相关,从感染后15天开始显著增加,表明早期检测潜力.
结论:
- 基于let-7-5p的RCA辅助CRISPR/Cas9测定是一种敏感和特定的工具,用于诊断甲基沙病.
- 这种方法提供了一个有前途的通用诊断方法,用于早期检测骨幼虫感染.
- 该试验能够在感染后15天就检测出感染,这对疾病管理和控制有重大影响.
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