使用原生质谱法对囊结合抗体-药物结合物的完整定量

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 药理学 药理学是指药理学的学科.

背景情况:

• 传统的抗体-药物合物 (ADC) 量化依赖于多重反应监测 (MRM) 质谱法,这是耗时的,并且对生物转化提供了有限的洞察力.
• 使用原生质谱法 (nMS) 在完整的蛋白质水平上量化ADC允许直接测量暴露和监测药物对抗体比率 (DAR) 变化.
• 特定站点的氨酸结合ADC通常依赖于非共价相互作用,使nMS特别适合它们的分析.

研究的目的:

• 开发和验证使用原生质谱 (nMS) 的抗体-药物联合体 (ADC) 的高通量,完整的定量化工作流程.
• 为了比较开发的nMS工作流程的性能与传统的基于多重反应监测 (MRM) 的方法,用于在临床前药理动力学研究中量化ADC.

主要方法:

• 建立了一个自动化工作流程,集成亲和力净化,本地质谱 (nMS) 分析与四极飞行时间 (QTOF) 高分辨率质谱,以及批量数据处理.
• 在缓冲系统中使用挥发性离子配对试剂优化了样品的制备,加上毛细血管大小排除色谱 (SEC) 进行高通量分析.
• 完整的量化工作流应用于小鼠药理动力学 (PK) 研究的样本,并与传统的基于MRM的方法的结果进行比较.

主要成果:

• 完整的量化工作流实现了5100μg/mL的线性动态范围,用一个小的血清样本体积 (20μL).
• 在使用完整的nMS量化工作流和传统的基于MRM的方法获得的小鼠体内PK测量之间观察到很好的一致性.
• 该nMS方法证明了ADC分析的高吞吐量能力.

结论:

• 原生质谱法 (nMS) 是一种可行且有效的方法,用于在临床前药物动力学研究中量化抗体-药物联合体 (ADC) 在完整的蛋白质水平.
• 开发的完整量化工作流作为分析ADC的多功能,高通量替代方案,增强对其体内稳定性和安全性的理解.
• 与传统技术相比,这种方法最大限度地减少了方法开发时间.