在Aureobasidium pullulans中由AMA1等离子体对gRNA和CRISPR/Cas9表达的基因组删除

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 菌类学 菌类学是指菌类学.
• 合成生物学 合成生物学

背景情况:

• Aureobasidium pullulans是一种黑酵母真菌,以其多极度耐受性而闻名,耐受零下温度和高盐度等条件.
• 基因组测序表明,A. pullulans具有产生有价值的生物活性代谢物的巨大潜力.
• 目前,在A. pullulans中进行基因组编辑的分子工具有限,这阻碍了充分利用其代谢能力.

研究的目的:

• 适应和验证基于等离子体的CRISPR/Cas9系统,用于Aureobasidium pullulans的高效基因组编辑.
• 克服A. pullulans中现有的基因组编辑工具的局限性,特别是对于缺乏可选择的表型的基因删除.

主要方法:

• 原来针对黑色杆菌 (Aspergillus niger) 开发的CRISPR/Cas9系统的调整.
• 使用基于AMA1等离子体的基因组编辑策略进行转换.
• 使用CRISPR/Cas9系统在A. pullulans中创建向基因删除菌株.

主要成果:

• 经过调整的CRISPR/Cas9系统证明了A. pullulans.中有效的基因组删除.
• 成功生成了30至862个基对的删除值的菌株.
• 基于等离子体的系统促进了标记基因的集成,以便在基因删除事件中进行选择.

结论:

• 开发的CRISPR/Cas9转换系统为A. pullulans的菌株工程提供了新的途径.
• 该系统支持Cas9和抗生素耐药性的共同表达,简化了编辑过程.
• 该战略有望实现A. pullulans.广泛的基因组工程和代谢物生产.