基因编码的位标签用于检测氨酸化介导的蛋白质与蛋白质相互作用

科学领域:

• 表观遗传学和分子生物学
• 化学生物学 化学生物学

背景情况:

• 像AF9这样的YEATS域蛋白对于调节DNA模板过程至关重要,这些过程通过与素基因素乙化 (Kac) 和化 (Kcr) 标记的相互作用来调节.
• 之前的工作确定了2-furancarbonyllysine (Kfu) 作为一种修饰,与Kac/Kcr.相比,对AF9 YEATS域的亲和力显著增强.
• 含有Kfu的类化合物作为研究AF9 YEATS域-海斯-氨酸酸化相互作用的有价值的化学工具.

研究的目的:

• 为了实现Kfu在细菌 (大肠杆菌) 和哺乳动物细胞中的基因整合.
• 开发一种新的,含有Kfu的表位标签 (RAY标签),用于对AF9 YEATS域相互作用的强大和选择性检测.
• 为了证明RAY-tag对询问AF9 YEATS域招募的实用性,在各种生物环境中通过基因素氨酸化介导.

主要方法:

• 在大肠杆菌和哺乳动物细胞中利用珀色子抑制技术将2-furancarbonyllysine (Kfu) 基因纳入.
• 设计了一种含有Kfu的表位标签,称为RAY标签,旨在对AF9 YEATS域进行特定的绑定.
• 将RAY标签与各种蛋白质模块融合,包括光蛋白和DNA结合蛋白,以评估其在不同细胞环境中的功能.

主要成果:

• 成功地将Kfu基因纳入 prokaryotic 和 eukaryotic 细胞系统.
• 开发了RAY标签,在体外和细胞内都证明了对AF9 YEATS域的强大和选择性结合.
• 验证了RAY标签能够促进AF9 YEATS域招募的研究,在与不同蛋白质效应剂融合时,以响应激素 lysine 乙化.

结论:

• 基因组合Kfu和RAY标签的开发为研究YEATS领域生物学提供了一个强大的新工具.
• 该RAY标签使得在各种细胞环境和生物过程中,能够调查依赖于基因组 lysine 化蛋白的蛋白质招募.
• 这项技术为深入了解AF9功能以及YEATS域蛋白在基因调节中的更广泛作用开辟了道路.