在电穿孔前离心处理对猪胚胎基因编辑的影响
Bin Liu1,2, Manita Wittayarat3, Koki Takebayashi1,2
1Bio-Innovation Research Center, Tokushima University, Tokushima, 7793233, Japan.
In vitro cellular & developmental biology. Animal
|June 4, 2024
概括
离心和 zona pellucida 移除通过减少马赛克突变,提高了猪生殖细胞中的 CRISPR/Cas9 基因编辑效率. 这些电解前处理改善了编辑结果,这取决于所使用的特定导向RNA.
科学领域:
- 遗传学 是一个遗传学.
- 分子生物学分子生物学
- 动物生物技术动物生物技术
背景情况:
- 基因马赛克主义在动物模型中对CRISPR/Cas9基因组编辑构成重大挑战.
- 在CRISPR/Cas9应用中最小化马赛克突变的现有策略并不是最终的.
研究的目的:
- 为了提高猪生殖细胞的CRISPR/Cas9基因编辑效率.
- 调查前电解处理对减少遗传马赛克的影响.
主要方法:
- 在猪肉中使用了CRISPR/Cas9技术.
- 应用离心和 zona pellucida 移除作为电解前处理.
- 使用指导RNA (gRNA) 向特定基因,包括GGTA1和CMAH.
主要成果:
- 2000 x g的离心法增加了GGTA1的总和单基突变率,但没有影响胚胎细胞形成.
- 离心法超过1000xg显著提高了CMAH的双基突变率和效率.
- 联合治疗增加了GGTA1和CMAH目标的双双基突变.
结论:
- 电解前的处理,如离心和 zona pellucida 移除,通过减少马赛克突变,对 CRISPR/Cas9 编辑效率产生积极影响.
- 离心法在减少马赛克的有效性取决于所使用的特定导向RNA.
