血液到生物标记物量化在不到一个小时内,使用高热酸蛋白酶的快速蛋白质学,使用高热酸蛋白酶

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 蛋白质组学是指蛋白质组学.

背景情况:

• 传统的自下而上的蛋白质组学由于多步骤,多小时的样本准备而耗时.
• 临床应用通常需要立即提供定量蛋白质组信息.
• 现有的方法受限于漫长的消化协议和二硫化物键重组.

研究的目的:

• 开发和评估快速蛋白质组学工作流程,用于近乎实时的生物标志物分析.
• 为了证明一种新型高热酸性 (HTA) 蛋白酶在加速样本消化中的实用性.
• 评估这种用于量化血液中蛋白质和的快速方法的性能.

主要方法:

• 使用了一种新型的高热酸 (HTA) 蛋白酶进行单步,快速的蛋白质消化 (5-30分钟) 在>80°C和pH3.
• 集成的HTA蛋白酶消化与高通量双陷柱单分析柱 (DTSC) 液态染色体质谱学 (LC-MS).
• 开发了一种工作流程,在血液样本方面,样本到答案的时间低于1小时.

主要成果:

• 从1微升全血中可重复量化超过160种蛋白质.
• 在不到30分钟的时间内实现了对 ангиотензин I 和 II 的敏感和有针对性的量化.
• 分析了53个人的血清和血,检测了素消化不识别的蛋白质.

结论:

• 快速的蛋白质组学工作流程大大减少了样本准备和分析时间.
• HTA蛋白酶和DTSC LC-MS组合使循环蛋白和生物标志物的近实时监测成为可能.
• 这种方法具有快速临床诊断和生物标志物发现的潜力.