使用CRISPR-Cas9高通量查来研究Leishmania infantum的耐药性

科学领域:

• 遗传学和基因组学 遗传学和基因组学
• 寄生虫学的寄生虫学
• 药物发现 药物发现 药物发现

背景情况:

• 莱什曼尼亚寄生虫对全球健康造成威胁,治疗选择有限.
• 莱什曼病的耐药性迫切需要开发新的治疗方法.
• 基因组查为识别药物标和抗药机制提供了一个有希望的方法.

研究的目的:

• 开发和验证Leishmania infantum全基因组的CRISPR-Cas9查系统.
• 为了确定赋予抗莱什曼药物抗药性基因的基因,米尔特福西因和安福特里辛B.
• 加速发现莱什曼病的新型治疗点.

主要方法:

• 设计和验证了一种用于单向导RNA (sgRNA) 克隆和表达的新型载体.
• 构建了一个全基因组sgRNA库,针对Leishmania infantum中的所有基因.
• 在选择性压力下使用米尔特福辛和安福特 B 进行了 CRISPR-Cas9 选,随后进行了 sgRNA 丰富分析和基因破坏实验.

主要成果:

• 在CRISPR-Cas9屏幕成功地识别了与抗米尔特福辛和B.安福特素耐药性相关的基因.
• 丰富的sgRNAs针对已知的药物标 (例如,米尔特素载体) 和新型基因 (例如,RING变异蛋白,醇24C-甲基转移酶).
• 基因破坏证实了已识别的基因在赋予药物耐药性的作用.

结论:

• 全基因组CRISPR-Cas9查在Leishmania中是可行的,特别是在强大的选择性压力下.
• 这种查策略是加速抗莱什曼药物发现的强大工具.
• 该研究确定了对抗莱什曼病的潜在新治疗点.