使用组合条形码的细菌的高通量单细胞转录组学
Karl D Gaisser1, Sophie N Skloss1, Leandra M Brettner2
1Institute for Systems Biology, Seattle, WA, USA.
Nature protocols
|June 17, 2024
概括
微生物分裂池结转录组学 (microSPLiT) 是一种用于细菌中高通量单细胞RNA测序的新方法. 这种技术可以在没有专门设备的情况下对数以百万计的细菌细胞进行分析,为转录组学研究提供了可扩展的解决方案.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 基因组学就是基因组学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 单细胞RNA测序 (scRNA-seq) 对于理解细胞异质性至关重要.
- 现有的细菌scRNA-seq方法通常需要专门的设备或规模有限.
研究的目的:
- 引入微生物分裂池绑定转录组学 (microSPLiT),一种高通量scrRNA-seq方法用于细菌.
- 为了使数十万到数百万个细菌细胞的可扩展的转录概况.
主要方法:
- microSPLiT使用四轮组合条形码来标记固定和透的细菌细胞内的转录.
- 细胞内结合反应在反转录后附加条形码.
- 在固定和初始条形码循环后,可以存储样品.
主要成果:
- microSPLiT可以在单个实验中对成千上万种格兰阴性和格兰阳性细菌的转录状态进行分析.
- 该协议在4天内生成了准备进行测序的库.
- 标准设置支持高达100万个细菌细胞和96个样本,具有可扩展性.
结论:
- microSPLiT为细菌单细胞转录组学提供了具有成本效益和可扩展性的解决方案.
- 该方法可供具有基本分子生物学经验的研究人员使用.
- 可以收集和储存细菌样本,使实验设计具有灵活性.


