对NGM DetectTM PCR放大套件的半体积验证及其对退化案例样本的应用

科学领域:

• 法医科学 法医科学 法医科学
• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.

背景情况:

• 从案例工作中降解的DNA样本在法医分析中提出了重大挑战.
• 现有的DNA放大套件可能很难从低质量的DNA中生成完整的个人资料.
• 为了解决这些局限性,开发了NGM DetectTM PCR放大套件.

研究的目的:

• 通过半体积聚合酶链反应 (PCR) 系统验证NGM DetectTM套件的性能.
• 评估该套件的长期应用和在基因定型退化案例样本中的有效性.
• 为了比较人工和机器人PCR制备方法用于DNA放大.

主要方法:

• 验证是根据DNA分析科学工作组和欧洲法医科学研究所网络的指导方针进行的.
• 通过使用不同的DNA输入量 (0.0375 ng到0.5 ng) 来评估灵敏度,可重复性和可重复性.
• 通过29个周期进行PCR,如果DNA输入低于最佳值 (≤0.5 ng),则增加到31个周期.
• 用手动PCR制备方法分析了84个退化的案例样本.

主要成果:

• 在0.5 ng的DNA输入时,无论制备方法如何,都观察到最佳的等位基峰高度和没有等位基掉落.
• 在0.0375 ng的DNA输入时,等位体脱落开始出现,手动PCR显示出较少的脱落.
• 增加的循环次数 (31) 导致1.9% (手动) 和4.4% (机器人) 的学.
• 对78.57% (低度),70.37% (中度) 和69.77% (高度) 的降解样本,获得了信息性资料.
• 低降解,中度降解和高降解样本的等位基因脱落率分别为26.05%,44.88%和51.23%.

结论:

• 建议使用NGM DetectTM套件在半体积的PCR系统中进行基因定型退化的DNA.
• 该套件证明了成功的长期应用,并从具有挑战性的法医样本中提供了信息化的配置文件.
• 在其他套件无法产生完整的DNA档案的情况下,鼓励其使用,特别是对于退化样品.