丝状真菌的亚基因组RNAi辅助菌株进化,以增强蛋白质生产

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 工业微生物学 工业微生物学

背景情况:

• 基因工程旨在改善微生物特征,但有线状真菌的低转化效率限制了进展.
• 在特定条件下的差异性基因表达可以揭示针对性操纵的关键调节因素.
• 亚基因组工程提供了一种比整基因组修改更有效的方法来提高微生物的性能.

研究的目的:

• 开发和应用一个子基因组工程策略,结合抑制减基因杂交 (SSH) 和RNA干扰 (RNAi),以增强线状真菌中的酶生产.
• 为了克服工业重要真菌的低转化效率的挑战,例如Trichoderma reesei和Humicola insolens.
• 确定参与T. reesei.细胞酶生产的新型调节基因.

主要方法:

• 在细胞酶诱导和抑制条件下构建SSH库以识别T. reesei中差异表达的基因.
• 采用RNA干扰 (RNAi) 来操纵已识别的基因子集以进行亚基因组工程.
• 在T. reesei和Humicola insolens中代地应用了结合SSH和RNAi的策略,用于催化酶生产.

主要成果:

• 改造的T. reesei表现出内葡萄糖酶生产的2.83.3倍改善.
• 确定了新的调节基因 (tre49304,tre120391,tre123541) 影响T. reesei中的细胞酶表达.
• 对T. reesei的代工程导致内葡萄糖酶活性增加了七倍 (75.6 U/mL).
• 使用相同的策略,提高了H. insolens的1.9倍 (28,500±288 U/mL) 的催化酶产生.

结论:

• 结合SSH和RNAi方法有效地克服了丝状真菌的低转换效率,以改善菌株.
• 亚基因组工程是一个可行的策略,用于代增强工业相关的酶生产.
• 这种方法适用于其他线状真菌,为各种产品的微生物菌株进化提供了多功能工具.